Tinción de Gram
Introducción
Las
bacterias son incoloras y se observan con dificultad al microscopio óptico. Los
cocos y los bacilos se pueden
identificar por su forma, agrupación y por la afinidad a los colorantes
utilizados en la tinción de Gram. Las
bacterias Gram positivas retienen el color azul violeta y las bacterias Gram
negativas el color rojo pálido. En general la tinción de Gram no es aplicable a
otros microorganismos como protozoos y hongos, exceptuando a las levaduras que
se tiñen como Gram positivas.
Objetivos
1.
Clasificar
algunas especies bacterianas en Gram positivas o Gram negativas de acuerdo a
esta tinción.
Materiales de laboratorio por equipo
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1 Asa bacteriológica de aro
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Fucsina
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1 Microscopio
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Cristal violeta
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2 Mecheros
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Lugol
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6 Portaobjetos y cubreobjetos
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Alcohol-cetona
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Cultivos bacterianos
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Papel para lente
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Aceite de inmersión
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Pinzas para tubo de ensaye
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Cronómetro
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Material del equipo
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Cerillos
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Colores
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Marcador indeleble o lápiz graso
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Cloro
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Franela
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Actividad de la práctica
Preparación del frotis
Fijación del frotis
Tinción diferencial de Gram.
- Cubrir
el frotis con dos gotas de cristal violeta durante 30 segundos a 1 minuto.
- Lavar
cuidadosamente el frotis con agua de la llave o destilada para eliminar el
exceso de colorante.
- Sacudir
un poco y dejar secar, cubrir el frotis con dos gotas de lugol por 30
segundos.
- Repetir
el paso 2
- Inclinar
el portaobjeto y aplicar gota a gota el decolorante dejando que escurra
hasta que no fluya más tintura.
- inmediatamente
repetir el paso 2.
- aplicar
dos gotas de safranina durante 30 segundos.
- repetir
el paso 2, eliminar cuidadosamente el exceso de agua con una toalla de papel
y dejar secar al aire.
- observar
al microscopio.
Resultados.
§
Reportar
las observaciones de forma, agrupación color y tamaño relativo tal como se
indica en el cuadro de resultados. Hacer los dibujos de la morfología de cada
uno de los microorganismos y colorearlos.
§
Comparar
las observaciones realizadas con las reportadas en la literatura.
Tinción de Gram
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Escherichia
coli
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Esquema
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Descripción
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Forma:
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Agrupamiento de células:
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Reacción Gram
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Cuestionario
1.
Explique
en forma completa la teoría que explica la tinción de Gram. Investigue otros
dos ejemplos de tinción diferencial.
2.
¿Cuáles
son las fuentes de error más comunes en la tinción de Gram?
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